蜂王人工授精技術是一種借助器械給蜂王進行人工配種的技術，運用此項技術不但可以準確無誤地使處女王和選定的雄蜂交配，而且還可進行在自然狀態下根本不可能發生的交配行為，如母子回交、父女回交、單雄授精等。蜜蜂人工授精技術廣泛用于原種保純繁育，培育近交系，雜交制種以及品種的提純復壯等方面。
一、雄蜂和處女王的選擇
雄蜂的質量關系著授精后蜂王的質量，與發育充分，體質健壯，無病害等優質雄蜂受精后，蜂王不但開產的時間早，而且產卵旺盛，維持正常產卵的時間也長。捕捉雄蜂的時間最好在中午12時之后至15時之前，在蜂群的巢門口選參加婚飛歸巢的雄蜂。性成熟的雄蜂行動敏捷，進巢迅速，因此，須在巢門口設置隔雄柵等障礙，才易于捕捉，凡腹部堅實又較小的，多數是性成熟雄蜂。腹部松軟的，較大的，多未成熟。婚飛歸巢的雄蜂興奮度較高，捕捉時若指力過大或受到壓擠，其體內陽莖則立即外翻并射精，所以要注意輕拿輕放。
授精前要對處女王進行選擇，一般是以個體大，腹部碩長，行動穩健活潑的處女王為佳。適宜處女王授精最佳時期為10～13日齡，也就是說處女王出房后10～13日。如果授精過早，由于處女王未到性成熟期，雖然已經授精，但精子轉移到蜂王貯精囊的速度較慢，精液在蜂王輸卵管內滯留時間較長，授精蜂王遲遲不能產卵，有的精液在蜂王輸卵管內變質導致蜂王死亡。若授精過晚，處女王在核群及框式王籠內時間過長，影響核群及框式王籠的使用效率。
二、儀器設備及消毒滅菌方法
主要儀器設備有實驗臺、藥品柜、蒸餾水器、體視顯微鏡（工作距離100毫米左右）、生物顯微鏡（1600×）、蜂王人工授精儀、微量注射器、高壓滅菌鍋、雄蜂籠、酒精燈、電爐、二氧化碳鋼瓶、膠管、常用玻璃器皿、注射器及日常用品。
實驗室地面用5%來蘇兒噴灑消毒；實驗室空間則用紫外線燈滅菌15分鐘。實驗臺面用75% 酒精擦拭。耐高溫的授精器械和附件用高壓滅菌鍋滅菌15～20分鐘，不耐高溫的器械用75%的酒精擦拭或灌洗滅菌。塑料注射針頭等用酒精消毒滅菌后，再用無菌蒸餾水加壓沖洗5～6遍。
三、采集雄蜂精液及注意事項
采集雄蜂精液前先強迫排精。當一切準備工作就緒時，在飛翔籠中捉出飛翔有力，腹部較堅實的雄蜂，通過手向腹部尾端施加壓力，使腹腔的血淋巴擠壓內陽莖，迫使陽莖漸次外翻。當陽莖球末端冒出淡黃褐色精液時，停止擠壓。在加壓時用力要穩妥，切勿操之過急，如用力過大，容易導致精液飛濺或陽莖球破裂。同時還要注意不要讓外翻的陽莖球及精液接觸到雄蜂體表面及操作者的手指，以及造成污染。隨即用微量采精器采集球面上的精液。首先將采精器吸入一小段空氣，使稀釋液與精液有氣泡相隔，以免精液混入大量稀釋液。但吸入的氣泡不能太大，如果吸入空氣較大，在采集精液或以后授精過程中受到阻力時；空氣會膨脹和壓縮變形，給采集精液或授精帶來不便，采集精液時，針尖要貼緊精液的表面，但又不能過深，以免將黏液吸入。采集完第一只后，再采集下一只雄蜂精液時，將前一只雄蜂精液推出針尖外一少部分，使其與準備采集的精液面相接觸，這樣既可防止吸入空氣，又可減少吸入黏液的機會。一旦發現吸入黏液要盡快排出，哪怕是稀黏液也不可以混入精液吸入針頭內。因為黏液不僅會堵塞針頭，如注射到蜂王側輸卵管后會凝固而堵塞輸卵管，這樣不僅影響精子進入貯精囊，而且還會造成蜂王死亡。采集精液結束時，針頭內仍然要吸入一段空氣，再用稀釋液封口，以免針口因精液凝固而堵塞。
四、授精及操作要求
授精要求進針角度合適，部位準確。生殖道無損傷，操作過程無污染，授精量足，操作速度快。
首先把裝有處女王的麻醉室固定在授精儀的麻醉室固定夾上，并調節工作距離，同時移動授精儀（或顯微鏡）使處女王的腹部呈現在視野中央，調節至清晰為止。待處女王通過麻醉進入昏迷狀態時，移動授精儀的背、腹鉤操縱桿，打開交配腔。這時，將背鉤伸到蜂王螫針鞘基部，并讓它嵌入基部的三角縫內。背鉤嵌入后，再一次調整背、腹鉤，把背腹板的距離拉開。此時即可看到交配腔中央靠近螫針鞘基部有一皺褶開口，該開口就是陰道口，移動注射器，排去針頭前端的保護液及氣泡，繼而施動縱向導軌使針尖接近陰道口，將陰道探針插入陰道，壓住陰道瓣突，使陰道口擴張。再調節縱向導軌使針尖沿著探針的背部徐徐進入陰道，直至中輸卵管，取出探針。當進針深度達1.8毫米時，略感到受到阻力后停止進針，然后將針頭稍退出一點，開始注射精液。一次性授精通常注射8微升；二次性授精每次各注射4～5微升精液。第一次與第二次授精間隔時間為24～48小時。注精完畢，稍待10～15秒后退出針頭，卸下麻醉室，小心退出蜂王，給蜂王作上標記，待蘇醒后送回原核群。
五、授精蜂王的管理
授精蜂王的管理，是指授精后至開始產卵這段時間的管理。蜂王人工授精是人工操縱器械完成的，蜂王沒有經過婚飛，雖然進行了授精，但是人工授精后的蜂王仍然會飛出巢外進行自然交尾活動。因此，必須采取相應的管理措施，防止蜂王再次自然交尾。目前控制人工授精蜂王出巢再交尾，多數是采取在小核群的巢門口安裝隔王珊或脫粉片的方法，控制蜂王飛出巢外。